孙韬，王春霞，杜凯，马艳云，唐小凤
【摘 要】意图：評价葡萄糖-6-磷酸异构酶（GPI）、抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体、抗骤变型瓜氨酸波形蛋白（MCV）抗体、抗聚角蛋白微丝蛋白抗体（AFA）在类风湿关节炎（RA）确诊中的含义，并比较多种目标联合检测在RA确诊中的含义。办法：对178例确诊为RA的患者进行血清学目标检测，并进行回忆性剖析。血清GPI、抗CCP抗体、抗MCV抗体、AFA检测均选用酶联免疫吸附法，选用χ2查验和Pearson相关剖析对多种目标在RA确诊中的价值及相关性进行比较，并对不同目标间的联合检测进行评论剖析。成果：GPI、抗CCP抗体、抗MCV抗体和AFA在RA组的特异性和灵敏度分别为65.00%和70.22%、95.00%和84.83%、78.33%和72.47%、75.71%和63.48%。RA组中GPI、抗CCP抗体、抗MCV抗体和AFA阳性率分别为70.22%、84.83%、72.47%、63.48%，显着高于对照组的11.67%、5.00%、21.67%、13.33%，差异有统计学含义（P < 0.001）；恣意3种或4种目标联合检测特异性较高，但灵敏度下降，显着低于单项检测抗CCP抗体，差异有统计学含义（P < 0.001）；恣意3种或4种目标联合检测较单一目标检测均具有较高的阳性率，差异有统计学含义（P < 0.001），尤其是GPI + 抗CCP抗体 + 抗MCV抗体 + AFA联合检测，RA组中阳性率可达96.07%。定论：GPI、抗CCP抗体、抗MCV抗体和AFA均可作为RA确诊的血清学目标，多种血清学目标联合检测有助于进步RA确诊的阳性率。
【关键词】 关节炎，类风湿；葡萄糖-6-磷酸异构酶；抗环瓜氨酸肽抗体；抗骤变型瓜氨酸波形蛋白抗体；抗聚角蛋白微丝蛋白抗体；类风湿因子
Clinical Analysis of the Combined Detection of Serum GPI，Anti-CCP Antibody，Anti-MCV Antibody
and AFA in the Diagnosis of Rheumatoid Arthritis
SUN Tao，WANG Chun-xia，DU Kai，MA Yan-yun，TANG Xiao-feng
【ABSTRACT】Objective：To evaluate significance of glucose-6-phosphate isomerase（GPI）and anti-cyclic citrullinated peptide（CCP）antibody，anti-mutated citrullinated vimentin（MCV）antibody，antifilaggrin antibody（AFA）in the diagnosis of rheumatoid arthritis（RA），and to compare the significance of combined detection of multiple indicators in RA diagnosis.Methods：The serological indexes of 178 patients with RA were examined and analyzed retrospectively.Serum GPI，anti-CCP antibody，anti-MCV antibody and AFA were detected by enzyme-linked immunosorbent assay.χ2 test and Pearson correlation analysis were used to compare the value and correlation of multiple indicators in the diagnosis of RA，and the joint detection between different indicators was discussed and analyzed.Results：The specificity and sensitivity of GPI，anti-CCP antibody，anti-MCV antibody and AFA in RA group were respectively 65% and 70.22%，95% and 84.83%，78.33% and 72.47%，75.71% and 63.48%.In group RA，the positive rates of GPI，anti-CCP antibody，anti-MCV antibody and AFA
were 70.22%，84.83%，72.47% and 63.48% respectively，significantly higher than those in the control group，i.e.11.67%，5%，21.67% and 13.33%，and the difference was statistically significant（P < 0.001）.Any three or four indicators combined detection had high specificity but low sensitivity，significantly lower than that of the single detection of anti-CCP antibody，and the difference was statistically significant（P < 0.001）.Any three or four indicators combined detection had a higher positive rate，and the difference was statistically significant（P < 0.001），especially the combined detection of GPI，anti-CCP antibody，anti- MCV antibody and AFA（with a positive rate to 96.07%）.Conclusion：GPI，anti-CCP antibodies，anti-MCV antibodies and AFA can all be used as serological indicators for RA diagnosis.Combined detection of multiple serological indicators is helpful to improve the positive rate of RA diagnosis.endprint
【Keywords】 arthritis，rheumatoid；glucose-6-phospho isomerase；anti-cyclic citrullinated peptide antibody；
anti-mutant citrulline vimentin antibody；anti-keratin microfilament antibody；rheumatoid factor
类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种常见的以滑膜炎及软骨危害为特征的缓慢本身免疫性疾病，易导致关节危害乃至残疾。前期确诊和及时医治可以有用防备骨关节疾病恶化、功用损失以及更为严重的成果[1]。很多研讨标明，关节安排的不可逆危害一般都会发生在患病后的2年之内。现在来说，RA最佳医治时刻是在疾病发生后3～6个月内，因而就需要在疾病前期阶段取得一个牢靠的确诊目标[2]。现在，有多种RA相关抗体检测可作为疾病确诊的实验室目标，类风湿因子（RF）作为最常用的检测项目被广泛应用于RA的临床确诊，但其特异性较低。随后，研讨人员发现的葡萄糖-6-磷酸异构酶[3]（GPI）、抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体[4]、抗骤变型瓜氨酸波形蛋白（MCV）抗体[5]、抗聚角蛋白微丝蛋白抗体（AFA）[6]则具有较高的特异性。本研讨旨在经过检测RA患者血清中GPI、抗CCP抗体、抗MCV抗体和AFA，剖析4种不同本身抗体在RA中的表达及多种目标联合检测在RA确诊中的临床效果。
1 材料与办法
1.1 一般材料 选取2015年5月至2016年12月在本院就诊的RA患者178例，男71例，女107例；年纪19～87岁，均匀（53.93±12.62）岁；病程1～
17年，均匀（6.13±2.79）年。一切患者均契合1987年美国风湿病学会（ACR）修订的RA分类规范。对照组为同期来本院健康体检者60例，男26例，女34例；年纪20～81岁，均匀（56.32±10.18）岁。
1.2 仪器与试剂 深圳汇松HEALES-MB580酶标剖析仪（深圳汇松科技开展有限公司）。GPI、抗CCP抗体、抗MCV抗体和AFA ELISA检测试剂盒（美国TSZ公司，出产批号TS-Z4402，201702）。
1.3 研讨办法 GPI、抗CCP抗体、抗MCV抗体和AFA均选用酶联免疫吸附法（ELISA）检测。阳性判别（Cut-Off值）：以样本阴性对照OD值 + 0.25（抗CCP抗体、AFA）；以样本阴性对照OD值 + 0.15（GPI、抗MCV），样本OD值﹥Cut-Off值，判定为阳性，反之，则为阴性。以上一切操作均严厉依照试剂盒说明书履行。
1.4 统计学办法 选用GraphPad Prism 6.01软件进行统计剖析。计量材料以标明，选用四格表核算4种抗体独自及联合确诊RA的各项点评目标；选用配对材料的χ2查验剖析不同抗体的阳性检出率之间的差异性。以P < 0.05为差异有统计学含义。
2 结 果
2.1 4种检测目标独自确诊RA的各项点评目标
GPI、抗CCP抗体、抗MCV抗体和AFA在RA阳性患者中的特异性和灵敏度分别为65.00%和70.22%、95.00%和84.83%、75.71%和63.48%、78.33%和72.47%，其间抗CCP抗体特异性和灵敏度均高于其他3种，差异有统计学含义（P < 0.001）；GPI特异性低，抗MCV抗体灵敏度低；抗CCP抗体和GPI、抗MCV抗体、AFA的特异性及灵敏度比较，差异均有统计学含义（P < 0.001）。见表1。
2.2 多种检测目标联合确诊RA的各项点评目标 联合检测时，GPI + 抗CCP抗体 + 抗MCV抗体、GPI +抗CCP抗体 + AFA、GPI + 抗MCV抗体 + AFA、抗CCP抗体 + 抗MCV抗体 + AFA、GPI + 抗CCP抗体 + 抗MCV抗体 + AFA在RA阳性患者中的特异性和灵敏度分别为83.33%和51.69%、88.33%和55.62%、93.33%和41.01%、91.67%和51.12%、98.33%和37.64%。其间对RA阳性患者特异性最高的是GPI + 抗CCP抗体 + 抗MCV抗体 + AFA，灵敏度最高的是GPI + 抗CCP抗体 + AFA。见表2。
2.3 4种检测目标在2组中的阳性率比较 RA组中GPI、抗CCP抗体、抗MCV抗体和AFA的阳性率分别为70.22%、84.83%、72.47%、63.48%，对照组中各检测目标的阳性率分别为11.67%、5.00%、21.67%、13.33%。两两比较，各组阳性率之间差异均有统计学含义（P < 0.001）。见表3。
2.4 多种目标联合检测在2组中的阳性率比较 RA组中GPI + 抗CCP抗体 + 抗MCV抗体、GPI + 抗CCP抗体 + AFA、GPI + 抗MCV抗体 + AFA、抗CCP抗体 + 抗MCV抗体 + AFA、GPI + 抗CCP抗体 + 抗MCV抗体 + AFA的阳性率分别为88.20%、91.01%、89.89%、85.96%、96.07%，对照组中各检测目标的阳性率分别为11.67%、5.00%、6.67%、3.33%、1.67%。两两比较，阳性率差异均有统计学含义（P < 0.001）。见表4。
3 讨 论
RA呈世界性散布，主要以女人患者多见，而且任何年纪均可发病。本研讨材料显现，女人与男性患者的人数份额为1.5∶1，均匀年纪（53.93±12.62）岁。现在，临床上選择的血清学检测目标主要是依托RF，该目标具有较高的灵敏度；但特异性较差，其他感染性疾病或本身免疫性疾病也可呈阳性，乃至5%～10%的健康人群也会呈现阳性[7]。GPI抗原作为一种多功用蛋白，在RA发病过程中关于血管增生、滑膜增殖及骨质损坏等方面起到了重要效果。因而，Zong等[3]将其作为一种新的确诊RA的血清学目标。Herve等[8]也发现RA患者血清中GPI抗原呈高浓度表达。本研讨对178例RA患者血清进行GPI抗原检测，成果与之前报导共同，RA患者血清中具有较高水平的GPI抗原，但特异性较低。别的，RA患者GPI检测具有杰出的阳性检出率，与对照组比较，差异有统计学含义（P < 0.001）。抗CCP抗体作为一种抗人工合成的环瓜氨酸肽，对RA无论是特异性仍是灵敏度都具有较高水平，确诊价值较高[4]。endprint
本研讨成果显现，抗CCP抗体在RA确诊中体现出较高的特异性和灵敏度，与文献报导共同。AFA的发现被证明对RA的确诊具有较高的特异性。研讨发现，AFA和抗CCP抗体可以辨认瓜氨酸纤维蛋白[6]。随后的研讨标明，瓜氨酸纤维蛋白对RA滑膜安排不具有较高的特异性，在脊柱关节疾病和骨关节炎滑膜内也都有被检出[9]。本研讨发现，AFA在RA患者血清中具有杰出的特异性和灵敏度，而且在RA组中具有较高的阳性率，与对照组比较，差异有统计学含义（P < 0.001）。波形蛋白是一类存在于细胞质中的中心纤维丝蛋白，该蛋白在巨噬细胞内随钙离子进入而被瓜氨酸化。MCV是表达在滑膜安排中的一类相关性本身抗体，瓜氨酸化和骤变都会影响其蛋白抗原性。现在，抗MCV抗体已被证明是一种更为灵敏的抗瓜氨酸蛋白抗体（ACPA）的抗原性靶点[6]。本研讨对178例RA患者血清进行抗MCV检测，成果显现，其具有杰出的特异性，但阳性率不是尤为杰出（仅63.48%）。
关于对不同目标的联合检测，Szekanecz等[10]发现，抗MCV抗体检测可以辨别一部分IgM-RF或许抗CCP抗体血清学阴性的RA患者，因而，抗CCP抗体和抗MCV抗体联合检测可以进步RA临床确诊阳性率。笔者的研讨发现，经过对不同目标的联合检测，恣意3种或4种目标联合检测时，特异性较单一目标有必定程度的升高，但灵敏度显着下降。虽然RF对RA的特异性不高，但RF继续性高滴度存在也可以猜测RA疾病的开展。IgM-RFs继续高水平开释是RA的典型体现，一起这种抗体高水平的继续存在也会促进RA疾病的发
展[11]。抗CCP抗体在患者初次呈现RA临床症状前14年就可在其血清中检测到，而IgM-RF在初次症状呈现10年前也可被检测到[12]。研讨标明，抗CCP抗体联合IgM-RF检测可以为确诊供给较为显着的灵敏度（可达88.2%），再加上抗MCV抗体和AFA的联合确诊可将RA确诊的灵敏度进步到90.1%[11]。本研讨进一步发现，多种目标联合检测时，特异性较单一目标显着升高，但灵敏度显着下降。多种目标联合检测较单一目标在RA组和对照组中的阳性检出率显着升高，尤其是GPI + 抗CCP抗体 + 抗MCV抗体 + AFA目标联合检测，可将临床确诊阳性率进步至96.07%。
综上所述，4项检测目标都有着杰出的单项效能，均可用于RA临床确诊。在单项目标检测中，GPI特异性不高，而抗CCP抗体具有较高的特异性和灵敏度。关于RA疾病的确诊，4项目标联合检测可补偿单项目标确诊RA的缺乏，有助于进步阳性检出率，关于RA疾病的防备及前期医治具有重要含义。因而，不同本身抗体多重联合血清学检测也会是往后疾病确诊和预后的有用手法。
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收稿日期：2017-07-14；修回日期：2017-08-30endprint
