陈艳伟++李沛++张仲博++赵利敬++史鹏博++巴正
【摘 要】意图：讨论办法对神经病理性痛苦模型大鼠部分镇痛作用作用及其作用机制，为办法镇痛供给理论依据。办法：将32只SPF级雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺组、办法组，每组
8只。除假手术组外，其他各组树立坐骨神经缓慢缩窄性损害（CCI）大鼠模型。建模成功后，针刺组给予针刺医治，办法组给予办法医治。调查办法对大鼠痛苦阈值的影响及办法医治后施术部分β-内啡肽的含量。成果：大鼠造模后，体现出跛行、抬足、舔足等痛觉过敏体现，与假手术组比较，差异有统计学含义
（P < 0.05）。办法能显着进步神经病理性痛苦大鼠的痛苦阈值（P < 0.05）；给予手术大鼠办法医治后，针刺组和办法组大鼠病灶部分β-内啡肽含量显着升高，与假手术组及模型组比较，差异有统计学含义（P < 0.05）。
办法组和针刺组比较，差异无统计学含义（P > 0.05）。定论：办法对CCI模型大鼠部分镇痛作用显着，其作用机制可能是经过升高施术部分β-内啡肽的含量而到达镇痛作用。
【关键词】 办法；CCI模型；神经病理性痛苦；镇痛；β-内啡肽；大鼠
Experimental Study on the Effect and Mechanism of Manipulation on CCI Model in Rats
CHEN Yan-wei，LI Pei，ZHANG Zhong-bo，ZHAO Li-jing，SHI Peng-bo，BA Zheng
【ABSTRACT】Objective：To explore the effect of manipulation on local analgesic effect in neuropathic pain rats and its mechanism，provide a theoretical basis for the technique of analgesia.Methods：Thirty-two healthy SD female rats were randomly divided into sham operation group，model group，acupuncture group and manipulation group，with 8 rats in each group.In addition to the sham operation group，the other groups were established sciatic nerve chronic constriction injury（CCI）rat model.After successful modeling，the acupuncture group was given acupuncture treatment，the manipulation group was given manipulation treatment.The content of the local application of beta endorphin manipulation effect on pain threshold in rats and after manipulation treatment.Results：After modeling，the rats showed a limp，lift the foot，foot licking hyperalgesia，compared with sham operation group，the difference was statistically significant（P < 0.05）.Manipulation can significantly improve the pain threshold of neuropathic pain rats（P < 0.05）.After the surgical rats were given treatment of manipulation，β-endophine content of acupuncture group rats and manipulation group significantly increased，there were significant differences compared to the sham operation group as well as the model group（P < 0.05）.There were no significant differences between acupuncture group rats and manipulation group（P > 0.05）.Conclusion：The effect of manipulation on local analgesia in CCI model rats was significant，its mechanism may be through increased application of local beta endorphin content and analgesic effect.
【Keywords】 manipulation；CCI model；neuropathic pain；analgesic；β-endorphine；rats
痛苦是危及人类健康和影响日子质量的严重医学难题。医治缓慢痛苦的首要困难就是清晰其病因、正确挑选镇痛办法。办法在缓解经筋体系痛苦方面作用必定，具有简洁验廉、副作用少的优势。临床工作中，笔者以中医经筋理论为辅导，对患者施以办法医治可以缓解大部分缓慢经筋痛苦。可是长期以来，关于办法缓解痛苦的作用机制研讨相对较少。已有研讨标明，在患者部分施以针刺和办法医治，可以添加血液中β-内啡肽（β-EP）等具有镇痛作用的神经递质，削减P物质（SP）等具有致痛物质的发生[1-2]。β-EP作为一种内源性类吗啡样物质，在按捺痛苦方面起到了重要作用。本试验拟在痛苦部位部分施以恰当办法以调查其镇痛作用及其对作用部分β-EP含量的影响，讨论办法部分镇痛的机制，为中医骨伤科办法医治经筋疾病供给科学依据和理论辅导。
1 试验材料
1.1 试验动物 SPF级雌性SD大鼠32只，体质量（200±20）g，由河南省试验动物中心供给，动物合格证号：SCXK（豫）2010-0002。IVC独立通气鼠笼，12/12 h昼夜替换节律下进行养殖，室温（22±1）℃，湿度（50±10）%。进行适应性喂食，并进行痛阈值挑选：测定值坐落8～30 s之间的大鼠归入试验。
1.2 试 剂 水合氯醛（大连美仑生物技能有限公司，出产批号B20150801）；β-EP试剂盒（上海朝瑞生物科技有限公司）；打针用青霉素钠（华北制药股份有限公司）。
1.3 首要仪器 酶标仪（Thermo Multisan）；安排匀浆机（QIAGEN）；高速离心机（Thermo）；非吸收性外科缝线（扬州市华祥医疗器械厂）。
2 方 法
2.1 分组与造模办法 将32只SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺组、办法组，每组8只。
假手术组：用2%戊巴比妥钠，0.3 mL·（100 g）-1麻醉，俯卧位固定好大鼠后，手术区备皮，消毒。于大鼠右侧背部切开皮肤，露出坐骨神经骨干，不对坐骨神经进行结扎，然后逐层消毒、缝合。
模型组：参照CCI模型造模办法[3]，麻醉，俯卧位固定好大鼠后，手术区备皮、消毒，取大鼠右侧膝部、髂棘的连线，其中点下方0.5 cm处，做一平行线，沿着此线切开大鼠腿部皮肤（约1～1.5 cm），钝性别离肌肉，露出坐骨神经骨干，用5-0铬制羊肠线松扎坐骨神经干4道，每2道之间距离1 mm，结扎强度以盘绕的羊肠线能在坐骨神经骨干上自在的滑动，不影响神经外膜血运为准则，然后逐层消毒、缝合，并给予青霉素腹腔打针，避免术后感染。大鼠在术前1 d禁食、禁水，羊肠线（5-0）用温盐水浸泡24 h，手术后大鼠部分缝合伤口血迹清洗洁净，并单笼养殖，避免自行咬破伤口，或相互撕咬形成动物伤口撕裂而逝世。
针刺组：造模同模型组，于第6天进行针刺医治，安静环境中将大鼠固定，动物于清醒状态下选取其环跳穴，针刺深度为0.5 cm，隔5 min行针一次，共20 min。
办法组：造模同模型组，于第6天在大鼠手术同侧环跳穴处施以按法，术者运用食指作用于环跳穴处，作用20 min。
2.2 调查目标及办法 各组别离于造模前1 d、医治前、医治后丈量大鼠热痛阈值，丈量结束后处死选材。处理标本后，运用β-EP试剂盒对标本进行丈量。
2.3 统计学办法 选用SPSS 19.0软件进行统计剖析。计量材料以标明，契合正态分布且方差齐，选用单因素方差剖析；医治前后比较，选用配对样本t查验；不契合正态性查验及方差齐性查验，则选用秩和查验。以P < 0.05为差异有统计学含义。
3 结 果
3.1 大鼠一般状况 假手术组大鼠皮裘光润，精力状态好，喜动，反响活络，饮食正常；模型组、针刺组、办法组造模后，大鼠精力萎靡，少活动，饮食较差，右足（术侧）呈现跛行、抬足、舔足等痛过敏体现。造模前各组大鼠体质量比较，差异无统计学含义（P > 0.05）；模型组、针刺组、办法组大鼠体质量与假手术组比较，差异有统计学含义（P < 0.05）；模型组、针刺组、办法组大鼠与造模前比较，差异有统计学含义（P < 0.05）。见表1。
3.2 大鼠各时期痛苦阈值改变 造模前，各组大鼠之间痛苦阈值比较，差异无统计学含义（P > 0.05）。医治前，各组大鼠之间痛苦阈值比较，差异有统计学含义（P < 0.05）；假手术组与模型组、针刺组、办法组比较，痛苦阈值显着下降（P < 0.05）；模型组、针刺组、办法组两两比较，差异无统计学含义
（P > 0.05）。医治后，假手术组与针刺组、办法组比较，差异有统计学含义（P < 0.05）；办法组、针刺组与医治前比较，差异有统计学含义（P < 0.05）；办法组和针刺组比较，差异无统计学含义（P > 0.05）。见表2。
3.3 各组大鼠医治后肌肉安排β-EP浓度比较 医治后，办法组和针刺组大鼠β-EP含量显着升高，办法组与假手术组、模型组比较，差异有统计学含义（P < 0.05），与针刺组比较，差异无统计学意
义（P > 0.05）。见表3。
4 讨 论
1988年，Bennett和Xie初次成功研制出大鼠CCI模型。因为CCI模型的制备办法较为简易，造模成功率高，观测模型大鼠痛阈值较为便利，自CCI模型制作出后就成为经典的缓慢痛苦模型。CCI模型造模手术操作简略明了，用时短，伤口小，技能要求低，对大鼠全体影响小，术后可呈现较为显着的痛阈值下降的症状：术肢自发痛、物理性影响痛觉过敏和痛觉超敏。试验中CCI模型大鼠体质量较假手术大鼠轻，反响迟钝，精力萎靡，少活动，饮食较差，右足（术侧）呈现跛行、抬足、舔足等痛过敏体现。这些痛阈值下降的现象标明试验造模成功，大鼠的缓慢痛苦模型较为典型。
临床工作中，在处理经筋类痛苦时，施术者往往以患者把柄为腧穴，在其周围把柄细心寻觅压痛点，并对该点及周围区域进行点、压、按、擦、推、扳、拍等办法操作，以到达通气散瘀消瘀、活血散结、消肿止痛、疏经通络的作用。临床实践证明，取把柄为腧穴可以使办法医治更直接、便利，作用愈加显着，操作更为简略。《灵枢·九针论》中记载办法合作药物可以加强成效，对肢体麻痹、筋脉不通类疾病有很好的作用，一起也能用于肢体功用训练。活血化瘀类药物可以助力办法活血行气、疏通经络，进步作用。办法和药物的合作可用于医治四肢麻痹、关节晦气等经筋病证。在临床恢复训练中可以运用办法和药物合作进步恢复功用训练的功率。在医治经筋疾病和患肢恢复训练时常将办法医治合作中药塌渍、熏蒸，往往可以取得较好的临床作用。
已有研讨标明，在患者部分施以针刺疗法和办法可以添加血液中β-EP等具有镇痛作用的神经递质，削减SP等具有致痛物质的发生[1-2]。中医经筋疾病的医治准则是“以痛为腧”[4]。针灸镇痛得到了很多临床实践验证，在医治经筋病亦遵从“以痛为腧”的准则，试验证明，针灸可以按捺炎性痛苦和神经病理性痛苦[5]。β-EP作为一种内源性类吗啡样物质，在按捺痛苦方面起到了重要作用。已有研讨证明，针刺可以影响血浆β-EP的含量添加，然后到达镇痛的作用，其含量与镇痛作用呈正相
关[6]。指针遵从针灸的原理作为一种共同的针灸办法是差异于一般针刺的非侵入性医治，痛苦患者更简单接受，临床上更简单展开。传统的阿片类药物是医治重度痛苦最有用的镇痛药物，它首要是经过按捺中枢神经元对损伤性影响的反响而起作用。研讨标明，阿片类药物的镇痛作用大部分是经过与外周阿片受体相结合而起到镇痛作用[7]。内源性阿片肽是按摩镇痛的重要物质根底[8]。β-EP是内源性阿片体系中镇痛作用较强的一种内啡
肽[9]。据报道，β-EP含量在缓慢痛苦患者血中水平较低，在痛苦患者相应的压痛点进行针刺和按压后取得镇痛效应时，患者血和脑脊液中的β-EP含量升高，其镇痛效应与升高起伏呈正相关，提示按摩发生镇痛作用可能与内啡肽升高有关[10]。冀斌等[11]运用四指推法可以有用医治腰椎间盘突出症，缓解腰背部痛苦以及双下肢痛苦。经过医治前后痛苦阈值对等到量化剖析患者医治前后血浆β-EP含量改变，发现经四指推法医治后的患者血浆β-EP含量较医治前显着升高，阐明四指推法的镇痛作用可能是经过调理外周血浆中β-EP的含量而完成的。
以往的研讨只能证明办法可以促进机体血浆内β-EP的含量升高，而没有直接的依据标明痛苦部位安排β-EP的含量与镇痛作用的联系。本试验是为了检测施术部位部分肌肉安排所含β-EP的含量，讨论办法镇痛更为直接的作用机制。试验成果证明大鼠痛阈值与部分肌肉安排β-EP的含量呈正相关。可以得出定论：办法对CCI痛苦模型是具有医治作用的。办法可以促进大鼠施术部位肌肉安排β-EP的含量升高，进步大鼠痛阈值。办法镇痛机制可能是经过升高部分β-EP的含量而到达镇痛作用。
5 参考文献
[1] 常小荣，艾坤，刘梨，等.电针足三里关元对佐剂性关节炎大鼠β-内啡肽ACTH的影响[J].中华中医药学刊，2009，29（4）：685-687.
[2] 董秀今.按摩办法对家兔腰椎间盘突出症模型血清中β-内啡肽及前列腺素E2的影响[D].沈阳：辽宁中医药大学，2013.
[3] Bennett GJ，Xie YK.A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man[J].Pain，1988，33（1）：87-107.
[4] 秦伟凯，赵勇，张宽.“以痛为腧”经筋病证痛点机制讨论[J].北京中医药，2011，30（9）：675-678.
[5] 付雄伟，陈波，洪寿海，等.常用针灸镇痛动物模型研讨渠道使用现状剖析[J].上海针灸杂志，2015，34（9）：899-902.
[6] 余兆晟.板机点理论与中医针灸于肩周炎医治的理论比较[D].广州：广州中医药大学，2015.
[7] 李秀坤，刘旭光，余曙光，等.艾灸对试验性RA家兔滑膜安排PGE2表达的影响[J].我国中医根底医学杂志，2006，12（10）：774-775.
[8] 王之虹.按摩办法学[M].北京：公民卫生出版社，2001：210-211.
[9] 周敏明，余昌喜，曹小定，等.褪黑素对大鼠电针镇痛效应的影响[J].针刺研讨，2000，25（2）：93-95.
[10] Vernon HT，Dhami MS，Howley TP，et al.Spinal manipulation and beta-endorphin：a controlled study of the effect of spinal manipulation on plasma beta-endorphin levels in normal males[J].J Manipulative Physiol Ther，1986，9（2）：115-123.
[11] 冀斌，张仕年，金宏柱，等.四指推法对腰椎间盘突出症患者痛苦指数及β-内啡呔的影响[J].江苏中医药，2007，39（10）：57-58.
收稿日期：2016-07-13；修回日期：2016-09-27
