刘静 谢克琴 曹跃朋 刘正奇 邓志勇 李贺 孙贵炎
【摘 要】意图：研讨Toll樣受体2（TLR2）、Toll样受体4（TLR4）、髓样分解因子88（MyD88）与痛风性关节炎患者临床及实验室目标的相关性。办法：选取120例痛风性关节炎患者，其间急性痛风性关节炎患者（急性组）76例，非急性痛风性关节炎患者（非急性组）44例；另选取健康者20例为健康对照组。记载一切患者的一般状况、病程、痛苦视觉模仿评分法（VAS）评分，查看肾功用、C-反响蛋白（CRP）、红细胞沉降率（ESR），酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测TLR2、TLR4、MyD88在外周血的浓度，选用SPSS 22.0软件剖析痛风性关节炎患者的外周血TLR2、TLR4、MyD88与各目标的相关性。成果：①痛风性关节炎患者外周血TLR2、TLR4、MyD88浓度较健康对照组显着升高，差异有统计学意
义（P < 0.01）；急性组患者外周血TLR2、TLR4、MyD88浓度较非急性组显着升高（P < 0.01）。②病程< 1年、1～5年、5～10年、> 10年的患者外周血TLR2、TLR4、MyD88比较，病程 < 1年的患者外周血TLR2、TLR4高，差异有统计学含义（P < 0.05）；其他病程段的痛风患者两两比较，差异无统计学含义（P > 0.05）。急性组患者VAS评分、ESR、CRP高于非急性组，差异有统计学含义（P < 0.01）。非急性组患者外周血尿酸高于急性组，差异有统计学含义（P < 0.05）；2组尿素氮、肌酐、胱抑素C比较，差异无统计学含义（P > 0.05）。④痛风性关节炎患者外周血TLR2、TLR4、MyD88与CRP、ESR呈线性正相关（P < 0.01或P < 0.05）。定论：TLR2、TLR4、MyD88参加了痛风性关节炎患者的发作、开展，尤其在急性期。
【要害词】 痛风性关节炎；Toll样受体；髓样分解因子88；相关性
【ABSTRACT】Objective：To study the correlation between clinical and laboratory indexes of TLR2， TLR4 and MyD88 in patients with gouty arthritis.Methods：One hundred and twenty cases of gouty arthritis were divided into an acute group（76 cases）and a non-acute group（44 cases），and twenty 20 healthy people were chosen as a control group.The general condition，course of disease，pain visual analogue scale（VAS）scores of all patients were recorded.The renal function，C-reactive protein（CRP）and erythrocyte sedimentation rate（ESR）were checked.The enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）were used to detect the concent-
rations of TLR2，TLR4，MyD88 in peripheral blood，and the software SPSS 22.0 was used to analyze the correlation between TLR2，TLR4 and MyD88 in peripheral blood and all the indexes.Results：①The concentrations of TLR2，
TLR4 and MyD88 in the peripheral blood of patients with gouty arthritis were significantly higher than those in the healthy control group，and the difference was statistically significant（P < 0.01）.The concentrations of TLR2，TLR4 and MyD88 in the peripheral blood of the acute group was significantly higher than those in the non-acute group（P < 0.01）.②Comparison among patients respectively with disease course of less than
1 year，1～5 years，5～10 years and over 10 years，TLR2 and TLR4 of those with less than 1 year of disease course were higher，and the difference was statistically significant（P < 0.05）.There was no statistical significance between patients with the other different disease courses（P > 0.05）.③The VAS score，ESR and CRP in the
acute group were significantly higher than those in the non-acute group，and the difference was statistically significant（P < 0.01）.The peripheral blood uric acid in the non-acute group was higher than that in the acute group，and the difference was statistically significant（P < 0.05）.The differences of urea nitrogen，creatinine and cystatin C in the two groups were not statistically significant（P > 0.05）.④TLR2，TLR4 and MyD88 in peripheral blood of patients with gouty arthritis were positively correlated with CRP and ESR（P < 0.01 or P < 0.05）.Conclusion：TLR2，TLR4 and MyD88 are involved in the occurrence and development of gouty arthritis，especially in acute phase.
【Keywords】 gouty arthritis；Toll-like receptor；MyD88；correlation
痛风性关节炎是单钠尿酸盐（MSU）结晶在关节软骨、滑膜及周围安排等堆积而引发非特异性炎症反响，分为急性期和非急性期。MSU结晶是炎症的潜在触发器，除了痛风急性发作炎症反响较重，痛风间歇期、缓解期、缓慢痛风和痛风石也遍及存在低水平的无菌性炎症[1]。MSU是一种内源性风险信号相关分子（DAMPs），被机体辨认后经过固有免疫引起炎症和细胞凋亡[2]。Toll样受体（TLRs）介导的通路和髓样分解因子88（MyD88）依靠的白细胞介素-1（IL-1）受体途径与MSU结晶引起的急性炎症有关，单核巨噬细胞的细胞膜外表存在Toll样受体2（TLR2）和Toll样受体4（TLR4）能够辨认细胞外的MSU晶体，并诱导IL-1β前体的转录，然后发作一系列炎症阶连反响[3]。
1 材料与办法
1.1 一般材料 选取2015年12月至2016年10月
在贵阳中医学院第二隶属医院风湿免疫科就诊的门诊或住院痛风性关节炎患者120例，一切患者均契合2015年美国风湿病学会（ACR）/欧洲抗风湿病联盟（EULAR）拟定的痛风分类规范[4]。其间急性痛风性关节炎患者（急性组）76例，非急性痛风性关节炎患者（非急性组）44例；男114例，女6例；年纪21～69岁，均匀（48.76±9.20）岁。健康对照组随机抽取贵阳中医学院第二隶属医院体检中心健康者20例，性别、年纪份额与痛风性关节炎患者类似。记载患者的详细病程长短，再进行病程分段：< 1年（7例）、1～5年（22例）、5～
10年（35例）、> 10年（56例）。本研讨经过贵阳中医学院第二隶属医院人体实验道德委员会审阅。一切归入病例签署知情同意书；扫除严峻心脑血管疾病、继发性痛风及兼并风湿免疫性疾病
患者。
1.2 首要仪器及试剂 三重纯水蒸馏器（上海亚荣生化仪器厂）；-20 ℃冰箱、4 ℃冰箱（中科美菱）；低温高速离心机（美国Thermo Forma公司）；超净作业台（苏洁净化有限公司）；酶标仪（美国BioTek公司）；电热恒温水域箱（天津泰斯特仪器有限公司）；微量移液枪（德国Eppendorf公司）；全自动生化剖析仪（日本TOSHIBA公司）；血沉仪（越华XC-A3A）；全自动血液剖析仪（Sysmex XT-2000i）；洗板机（凯特生物医疗电子科技有限公司）；TLR2 ELISA试剂盒、TLR4 ELISA试剂盒、MyD88 ELISA试剂盒（上海劲马生物科技有限
公司）。
1.3 标本搜集及检测办法 一切归入病例均清晨空腹肘部静脉采血，分别用惯例抗凝管、生化管收集5 mL静脉血，随即送往贵阳中医学院第二隶属医院查验科，运用全自动生化剖析仪检测肾功用及全程C-反响蛋白（CRP），血沉仪检测红细胞沉降率（ESR）。将生化管收集的静脉血置于离心机以3000 r·min-1离心10 min，取血清于无菌EP管内，放于-20 ℃冰箱保存，供ELISA检测。临检测时，首先将放于-20 ℃冰箱中保存备用的血清取出，放在室温冻结，一起实验开端前把人TLR2、TLR4、MyD88酶联免疫法吸附测定试剂盒取出在室温中放置30 min，依照ELISA试剂盒阐明书进行操作。
1.4 痛苦视觉模仿评分法（VAS）评分 痛苦
10 cm水平视力对照表[5]：用一条长为10 cm可滑动游标标尺，两头分别为0分和10分。患者指出最能代表痛苦程度的方位，医生记载评分。0级，没有痛苦；1～3级，轻度痛苦，能正常活动；4～
6级，中度痛苦，日子可自理，但影响作业；7～9级，较严峻的痛苦，日子不能自理；10级，剧烈痛苦，无法忍受。
1.5 统计学办法 选用SPSS 22.0软件进行统计剖析。计量材料以标明，契合正态散布，满意方差齐性，2组间比较选用独立样本t查验，多组间样本材料选用单因素方差剖析；不契合正态散布选用非参数（秩和）查验；计数材料以频数和百分比标明，选用χ2查验；相关性剖析，数据呈偏态散布选用Spearman剖析。以P < 0.05为差异有统计学含义。
2 结 果
2.1 痛风性关节炎组与健康对照组TLR2、TLR4、MyD88比较 痛风性关节炎患者外周血TLR2、TLR4、MyD88浓度显着高于健康对照组，2组比较，差异有统计学含义（P < 0.01）。见表1。
2.2 急性组与非急性组TLR2、TLR4、MyD88比较 急性组与非急性组痛风性关节炎患者外周血TLR2、TLR4、MyD88浓度比较，差异有统计学含义（P < 0.01）。见表2。
2.3 不同病程TLR2、TLR4、MyD88比較 病程 < 1年、1～5年、5～10年、> 10年的患者外周血TLR2、TLR4、MyD88比较，病程< 1年的患者外周血TLR2、TLR4较高，差异有统计学含义
（P < 0.05）；其他各病程段两两比较，差异无统计学含义（P > 0.05）。见表3。
2.4 痛风性关节炎与VAS评分、CRP、ESR的联系 数据材料经查验，不契合正态散布，各组间比较选用非参数查验（秩和查验）。患者痛苦VAS评分急性组及非急性组差异有统计学含义
（P < 0.01）。痛风性关节炎急性组患者外周血CRP、ESR显着升高，与非急性组比较，差异有统计学含义（P < 0.01）。见表4。
2.5 痛风性关节炎与肾功用各目标的联系 非急性组患者外周血尿酸高于急性组，2组比较，差异有统计学含义（P < 0.05）；2组尿素氮、肌酐、胱抑素C比较，差异无统计学含义（P > 0.05）。见表5。
2.6 TLR2、TLR4、MyD88与临床及实验室目标的相关性剖析 各目标经查验后呈偏态散布，选用Spearman查验剖析了解其相关性，成果提示，痛风性关节炎患者外周血TLR2、TLR4、MyD88与CRP、ESR呈线性正相关（P < 0.01或P < 0.05）。见表6。
3 讨 论
近年来对痛风急性发作的机理研讨显现，TLRs介导的通路和MyD88依靠的IL-1受体途径与MSU结晶引起的急性炎症有关[6]。TLRs是Ⅰ型跨膜蛋白受体，包括胞外区、跨膜区、胞内区，胞外区含有不同长度的亮氨酸重复区域，参加配体的辨认；细胞内羧基结尾包括一个保存部位，与IL-1受体类似，被称为Toll/IL-1受体结构域（TIR），依靠TIR的嗜同性效果和下流接头蛋白的TIR结合来传导信号[7]。TLRs经过辨认相应的配体，然后与这些配体结合，再经过MyD88和干扰素TIR结构域联接蛋白（TRIF）依靠性途径（非MyD88依靠性途径）下传信号，激活核转录因子-κB（NF-κB）和激活蛋白1（AP-1），发动相关靶基因的转录，快速激活致炎因子IL-1、IL-6、IL-8、IL-12、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素（IFN）、趋化性细胞因子、黏附分子、环氧化酶-2（COX-2）和诱生型一氧化氮合成酶的转录，这些酶的产品和细胞因子在炎症反响中发挥要害效果[8-15]。IL-β是MSU晶体诱导炎症的要害因子，而TLR2和TLR4能够辨认细胞外的MSU晶体，诱导IL-β前体的转录[16]。TLRs是决议MSU晶体堆积引起痛风性关节炎的首要因素，TLRs/MyD88信号通路参加了痛风性关节炎的炎症反响进程。因而，TLRs/MyD88信号通路是一个具有多种调理功用的传导通路，在痛风性关节炎的炎症反响进程中起重要效果[17]。国表里很多研讨均标明TLR2、TLR4、MyD88与炎症反响密切相关[18-20]。本研讨发现，急性组患者痛苦VAS评分、ESR、CRP高于非急性组，提示痛风性关节炎急性期炎症反响重，患者片面感觉痛苦显着。ESR、CRP现在被遍及认为是炎症进程中的急性时相反响物，本研讨急性组与非急性组ESR、CRP均匀数值均高于基线值，阐明不同证型的痛风性关节炎患者均存在不同程度的炎症。非急性组患者外周血尿酸高于急性组，急性组、非急性组中尿素氮、肌酐、胱抑素C没有差异，急性痛风性关节炎患者血尿酸往往不高，尿素氮、肌酐、胱抑素C受病程、病况严峻程度等影响，与痛风是否急性发作无相关性。进一步对痛风性关节炎临床、实验室目标与TLR2、TLR4、MyD88进行相关性剖析后发现，痛风性关节炎患者外周血TLR2、TLR4、MyD88与ESR、CRP呈正相关，提示痛风性关节炎的发作、开展受TLRs/MyD88信号通路介导，且参加痛风的炎症反响，痛风性关节炎的不一起期均存在炎症，在急性期体现更为
激烈。
本研讨成果提示，TLR2、TLR4、MyD88参加了痛风性关节炎患者的发作、开展，尤其在急性关节炎期。总归，痛风性关节炎的发病机制杂乱，很多信号通路、细胞因子参加痛风的发病，研讨TLRs/MyD88信号通路与痛风性关节炎临床及实验室目标的相关性，进一步阐明晰痛风性关节炎的发病机制，以期辅导猜测病况、评价效果。现在咱们关于TLRs/MyD88信号通路在痛风性关节炎中的研讨尚处于初探阶段，下一步将经过不同的办法进一步深入研讨。
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收稿日期：2017-10-09；修回日期：2017-12-15
