赵利敬+李沛+张仲博+陈艳伟+史鹏博+巴正
【摘 要】意图：讨论理筋办法对炎症性痛苦大鼠的部分镇痛效果及其机制。办法：将24只SPF级健康雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、办法组，每组8只。除空白组外，其他2组在大鼠足底皮下注射0.1 mL弗氏彻底佐剂，树立佐剂性外周炎性痛模型，经过在痛苦部分施以理筋办法，调查办法对大鼠炎症反响、痛苦阈值及部分腺苷含量的影响。成果：造模后，大鼠呈现致炎侧足跛行、舔爪、红、肿及热痛敏等反响。造模部分安排可见炎性细胞滋润，肌纤维的萎缩等。办法能按捺弗氏佐剂导致的大鼠缩足、舔爪等自发痛行为，进步炎性痛大鼠的痛苦阈值（P < 0.05）；且能进步大鼠足底病灶部分腺苷含量，办法组部分腺苷含量与空白组、模型组比较，差异有统计学含义（P < 0.05）。定论：理筋办法部分镇痛效果显着，其部分镇痛效果或许经过部分腺苷开释而起效果。
【关键词】 理筋办法；彻底弗氏佐剂；炎性痛；镇痛效果；腺苷；大鼠
Experimental Study on the Local Analgesic Effect of Tendon-Soothing Manipulation on Rats with Periphery Inflammatory Pain and Its Mechanism
ZHAO Li-jing，LI Pei，ZHANG Zhong-bo，CHEN Yan-wei，SHI Peng-bo，BA Zheng
【ABSTRACT】Objective：To investigate the local analgesic effect of tendon-soothing manipulation on rats with periphery inflammatory pain and its mechanism.Methods：Twenty four healthy female SD rats were randomly divided into a blank group，a model group and a manipulation group，with 8 rats in each group.Except the blank group，the other two groups were given subcutaneous injection of 0.1 mL Freund's adjuvant in the plantar to establish models with adjuvant peripheral inflammatory pain.Tendon-soothing manipulation was used to observe its effect on their inflammatory reaction，pain threshold and local content of adenosine.Results：After modeling，rats had the following reactions：claudication on the inflammatory side，licking claws，red，swollen and heat hyperalgesia.Inflammatory cell infiltration and atrophy of muscle fibers were seen in the local tissue for modeling.Manipulation could inhibit Freund's adjuvant caused spontaneous pain behaviors such as curling up legs and licking claws and lift their pain threshold（P < 0.05）.It also could improve the content of adenosine in rats plantar lesions.The difference of the content of adenosine between the manipulation group，the blank group and the model group was statistically significant（P < 0.05）.Conclusion：The tendon-soothing manipulation has an obvious local analgesia，whose function may be played by locally released adenosine.
【Keywords】 tendon-soothing manipulation；complete Freund's adjuvant；inflammatory pain；analgesic effect；adenosine；rats
理筋办法是中医骨伤科医治筋伤的常用办法，具有活血止痛、散失瘀肿、理顺筋脉、免除筋肉痉挛、使筋出槽、骨错缝得以纠正至正常的效果[1]。其在缓解痛苦方面效果杰出，可是长期以来关于理筋办法缓解痛苦的效果机制研讨相对较少。本试验模仿临床的理筋办法医治，调查办法对佐剂性炎症大鼠的镇痛效果，讨论办法缓解缓慢炎症痛的效果机制，为临床理筋办法部分镇痛效果供给理论依据。
1 试验材料
1.1 试验动物 选取SPF级健康雌性SD大鼠
24只，体质量（210±20）g，2～3月龄，由郑州大学医学试验动物中心供给，动物许可证号：SCXK（豫）2010-0002。大鼠独立通气笼（IVC），12/12 h昼夜替换节律下进行养殖。适应性喂食，并进行根底痛阈挑选。检测办法[2]：恒温水浴锅调理至51 ℃，热板预热10 min，使后足底触摸热板，记载大鼠从放上热板到呈现舔右后足痛反响的时刻。整个测验环节坚持安静，室温20～25 ℃，每次检测后歇息5 min，进行下次检测。共测定3次，取丈量平均值归入统计数据。测定值坐落8～30 s之间的大鼠归入试验。
1.2 仪器及设备 弗氏彻底佐剂（美国Sigma公司，F5881）；大鼠腺苷酶联免疫试剂盒（上海朝瑞生物科技有限公司）；HWS-26电热恒温水浴锅（上海齐欣科学仪器有限公司）；BX61型全能显微镜（Olympus）；酶标仪（Thermo，Multisan FC）等。
2 方 法
2.1 动物分组及处理 将24只SD大鼠随机分为空白组、模型组、办法组，每组8只。空白组不造模，也不医治，在安静环境中，固定大鼠，使动物处于清醒状况，固定20 min；模型组参照Raghavendra[3]的造模办法，于试验第1天，在大鼠右后足垫部皮下注射0.1 mL弗氏彻底佐剂致炎，树立大鼠佐剂性炎症痛苦模型，不给予医治，其他处理与空白组相同。办法组造模办法同模型组，造模后第4天
在大鼠右足底涌泉穴（取后肢脚掌心前正中）[4]给予中点拨压法办法[1]医治，时刻20 min。经过丈量大鼠右后脚掌周径对模型进行点评[5]，分别在造模前、造模后、医治后测验各组大鼠的热痛苦阈值。丈量结束后，马上脱臼处死，取大鼠右侧足底肌肉安排。
2.2 办法挑选 用手指在所挑选的适宜穴道上进行点穴按压，又称之为穴道按摩[1]。本试验选用中点拨压法，依照点压法相应的操作办法进行，依据中医“以痛为腧”的准则，对大鼠足底涌泉穴处进行办法操作。
2.3 安排切片制造及目标检测 大鼠足底肌肉安排经质量分数为10%的甲醛固定，经不同浓度梯度的乙醇逐级对安排进行脱水，白腊包埋，切片，进行苏木素-伊红（HE）染色，用Olympus全能显微镜调查安排病理变化；腺苷检测选用Elisa法。
2.4 统计学办法 选用SPSS 19.0软件进行统计分析。计量材料以表明，契合正态分布且方差齐，用单因素方差分析；组内医治前后比较，选用配对样本t查验；不契合正态性查验及方差齐性查验，则选用秩和查验。以P < 0.05为差异有统计学含义。
3 结 果
3.1 大鼠一般状况 空白组大鼠精力状况好，喜动，反响活络，饮食正常；模型组和办法组造模后，大鼠精力萎靡，少活动，致炎侧足部不敢着地、跛行、舔足等；致炎侧足部呈现红肿，且在24 h左右到达顶峰。这些体现继续3 d后逐步减轻。见图1。
3.2 各组大鼠造模前后右足脚掌周径比较 造模前，各组大鼠右足脚掌周径比较，差异无统计学含义（P > 0.05）。造模后，模型组和办法组大鼠右足脚掌周径较造模前添加（P < 0.05），与空白组比较，差异有统计学含义（P < 0.05）。见表1。
3.3 安排病理学 模型组大鼠肌肉安排可见炎性细胞滋润，肌纤维的萎缩，肌纤维空隙增宽，小血管增生等病理改动。见图2。
3.4 各组大鼠造模前后及医治后热痛苦阈值比较 造模前，各组大鼠热痛阈值比较，差异无统计学含义（P > 0.05）；造模后，模型组、办法组与空白组比较，痛苦阈值均有显着下降（P < 0.05）；模型组与办法组比较，差异无统计学含义（P > 0.05）。医治后，办法组热痛阈值与造模后比较显着升高
（P < 0.05）；模型组、办法组与空白组比较，差异有统计学含义（P < 0.05）；模型组与办法组比较，差异有统计学含义（P < 0.05）。见表2。
3.5 各组大鼠医治后腺苷浓度比较 医治后，空白组与模型组腺苷浓度比较，差异无统计学含义
（P > 0.05）；办法组大鼠外周安排腺苷含量显着升高，与空白组及模型组比较，差异有统计学含义（P < 0.05）。见表3。
4 讨 论
关于理筋办法缓解痛苦的理论思维早在《黄帝内经·素问》[6]举痛论中记载：“按之则热气至，热气至则痛止矣。”阐明办法可以使机体发生热效应，而这种热效应可以镇痛，这也是本课题的理论依据地点。
腺苷即腺嘌呤核苷，由腺嘌呤与戊糖相结合而构成，是一种广泛存在于周围和中枢神经系统的神经递质[7]。有研讨显现，腺苷对神经源性痛苦、炎性痛和术后痛均具有镇痛效果[8-10]。Goldman等[11]经过研讨发现，针刺的镇痛效果或许是经过部分开释腺苷效果于腺苷A1受体而完成。Takano等[12]则进一步提出了针刺在人体受试者是否也会引起间质性腺苷浓度的添加。他们经过丈量受试者在针刺之前、针刺过程中及针刺30 min后足三里的腺苷浓度，发现针刺过程中腺苷浓度显着升高，并继续到针刺后30 min，进一步证明了腺苷在针刺镇痛的关键效果。
笔者在大鼠足底部分皮下注射弗氏彻底佐剂，成功树立了大鼠炎性痛模型，成果显现：造模后大鼠精力萎靡，少活动，致炎侧足部不敢着地、跛行、舔足等，且热缩爪潜伏期显着缩短，体现为痛觉过敏，与空白组比较，差异有统计学含义（P < 0.05）。病理成果显现：模型大鼠造模部位肌肉安排可见炎性细胞滋润，肌纤维萎缩，肌纤维空隙增宽，小血管增生等，与空白组比较，这种差异非常显着，这与相关文献报导[13]共同。《黄帝内经·灵枢集注》中有“以痛为腧，随其把柄而即为所取之俞穴也”之论说，对大鼠足部涌泉穴进行办法医治，是根据中医学“以痛为腧”理论的研讨，证明了按压涌泉穴可以缓解炎症痛大鼠的痛苦，与研讨报导一
致[14]。 在给予大鼠办法医治后，其部分腺苷浓度，空白组与模型组之间进行比较，差异无统计学含义（P > 0.05）；办法组大鼠外周安排腺苷含量显着升高，与空白组、模型组比较，差异有统计学含义（P < 0.05）。以上阐懂事筋办法部分镇痛效果显着，其或许经过部分腺苷开释而起效果。
5 参考文献
[1] 樊粤光，詹红生.中医骨伤科学[M].北京：公民卫生出版社，2014：39-44.
[2] 曹丽娟，韩超，王双华.金铃子散及单味药镇痛抗炎效果的比较[J].天津药学，2012，24（1）：9-11.
[3] Raghavendra V，Tanga FY，DeLeo JA.Complete Freunds adjuvant-induced peripheral inflammation evokes glial activation and proinflammatory cytokine expression
in the CNS[J].Eur J Neurosci，2004，20（2）：467-473.
[4] 华兴邦，李辞荣，周浩良，等.大鼠穴道图谱的研
制[J].试验动物与动物试验，1991（1）：1-5.
[5] 李娜.针刺缓解小鼠彻底弗氏佐剂性外周缓慢炎症痛的效果及其机制[D].上海：复旦大学，2008.
[6] 黄帝内经素问[M].北京：公民卫生出版社，
1963：218-223.
[7] Dunwiddie TV，Masino SA.The role and regulation of adenosine in the central nervous system[J].Annu Rev Neurosci，2001，24：31-35.
[8] Balasubramanyan S，Sharma SS.Protective effect of adenosine in diabetic neuropathic pain is mediated through adenosine A1-receptors[J].Indian J Physiol Pharmacol，2009，52（3）：233-242.
[9] Yamaoka G，Horiuchi H，Morino T，et al.Different analgesic effects of adenosine between postoperative and neuropathic pain[J].J Orthop Sci，2013，18（1）：130-136.
[10] Zahn PK，Straub H，Wenk M，et al.Adenosine A1 but not A2a receptor agonist reduces hyperalgesia caused by a surgical incision in rats：a pertussis toxin-sensitive G protein-dependent process[J].Anesthesiology，2007，107（5）：797-806.
[11] Goldman N，Chen M，Fujita T，et al.Adenosine A1 receptors mediate local anti-nociceptive effects of acupuncture[J].Nat Neurosci，2010，13（7）：883-888.
[12] Takano T，Chen X，Luo F，et al.Traditional Acupuncture Triggers a Local Increase in Adenosine in Human Subjects[J].J Pain，2012，13（12）：1215-1223.
[13] 李培培，解国雄，宋珊珊，等.大鼠佐剂性关节炎型体现特征及点评目标[J].我国免疫学杂志，2012，28（5）：453-457.
[14] 杨琳，高秀来，刘霞，等.经皮神经电影响大鼠涌泉穴的fMRI体现和对痛阈的影响[J].放射学实践，2005，20（12）：1087-1089.
收稿日期：2016-07-13；修回日期：2016-11-03
