王宝春++孙萍++丁桃红++殷海霞
【摘要】皂苷类是人参的首要成分和药效成分,选用高效液相色谱法可精确测定人参中各皂苷类成分,本文首要介绍选用液相色谱测定在超微破坏技能下得到不同粒度的粉末中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的含量。
【关键词】高效液相色谱法,人参,人参皂昔
【中图分类号】R284 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095-6681.2016.36..02
本品为五加科植物人参Pana:c ginseng C.A.Mey.的枯燥根和根茎。它具有大补元气,补脾益肺,生津养血,安神益智等之成效。临床用于体虚欲脱,肺虚气喘,肢冷脉微,脾虚食少,口渴少津,内热消渴,气血缺乏等[1]。皂苷类成分是人参的首要活性物质和药效成分,因而进步它的提取率就可增强其生物利用率,以下将介绍同一批次的人参,在样品通过振动磨型超微破坏机破坏后得到不同粒度的粉体的皂苷含量进行丈量[2]。
1 实验仪器与资料
1.1 实验仪器
AEL-200电子天平(沈阳龙腾电子称量仪器有限公司),AB204-N精细剖析天平(METTLER TOLEDO),Agilent 1260型HPLC(Agilent Technologies),TKCD-1006超声波清洗仪(南昌科昌达超声波设备厂),Heal Force final Filter超纯水機(上海浦东剖析仪器设备厂),HH-4数显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司),SQW-25系列超微破坏机(山东济南三清易辰)。
1.2 实验资料
人参皂苷规范品Rb1,Re,Rg1:我国药品生物制品检定所;乙腈(HPLC)。
1.3 样品制备
同一批次人参(吉林省长白山):人参粗粉(过40目筛);人参样品通过超微振动磨型得到粒径别离为76.006~86.348 μm、29.963~30.025 μm、25.088~25.488 μm、22.163 μm。
1.4 对照品溶液的制备
取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rg1对照品适量,精细称定,加甲醇定容;别离精细量取上述对照品溶液各1 mL,置于同一10 mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。每1 mL各含0.2 mg的混合溶液。
1.5 供试品溶液的制备
称取5种人参样品各约1 g,精细称定,置索氏提取器中,精细加50 mL三氯甲烷置于磨口锥形瓶内,于水浴加热80℃回流3 h,倒掉三氯甲烷液,药渣挥干溶剂,将滤纸筒同时移入100 mL锥形瓶中,加50 mL水饱满正丁醇,密塞,放置过夜,通过30 min超声处理(功率250 W,频率50 kHz),滤过,弃去初滤液,精细量取续滤液25mL,置蒸发皿中蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至5 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
1.6 色谱条件
色谱条件:色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;活动相C设为乙腈,活动相D设为水,按下表规则进行梯度洗脱;检测波长为203 nm,柱温为30°C,流速1 ml/min。理论塔板数按人参皂苷Rg1峰核算应不低于6000。别离精细汲取对照品溶液与供试品溶液各20 uL,注入液相色谱仪,测定,即得,成果见各图。
2 办法学调查
2.1 线性关系
别离精细汲取“1.4”项下对照品储藏液0.2 ml、0.4 ml、0.6 ml、0.8 ml、1.0 ml、1.2 ml置于10ml容量瓶中,用甲醇定容至刻度。在上述“1.6”色谱条件下对对照品溶液进行液相剖析和测定,记载高效液相色谱图并记载各对照品峰面积,以对照品浓度(ug/ml)为横坐标(x),以对照品峰面积为纵坐标(y),制作对照品的规范曲线,并核算回归方程。人参皂苷Rg1:y=5.8176x-26.169,R2=0.9995,、人参皂苷Rg1:y=6.2582x-20.610 ,R2=0.9996和人参皂苷Rg1:y=12.435x+10.380,R2=0.9998。成果标明范围内浓度与峰面积具有杰出的线性关系。
2.2 精细度实验
选取同一浓度的混合对照品溶液,在“1.6”色谱条件下接连进样6次,记载峰面积,并别离核算峰面积的相对规范偏差RSD%值,成果如下:样品中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1相对规范偏差RSD值别离为0.94%,0.57%,1.57%,,标明该办法稳定性杰出。
2.3 稳定性实验
取同一批人参供试品溶液1ml,精细量取,按“1.5”供试品制备办法制备样品,别离于0、2、4、8、12、24h在“1.6”色谱条件下对供试品进行液相剖析,记载峰面积,并别离核算峰面积的相对规范偏差RSD%值,成果如下:0.23%,1.14%,0.59%阐明供试品溶液在24h 内其化学性质有较好的的稳定性。
2.4 重复性实验
取同一批人参供试品溶液1ml,精细量取,按“1.5”供试品制备办法制备6份样品,按上述办法测定,以峰面积核算人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的含量,并别离核算含量相对规范偏差RSD%值,成果如下:人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1相对规范偏差RSD值别离为:0.48%,0.53%,1.28%,标明该办法重复性杰出。
2.5 回收率实验
称取0.5 g人参粗粉置于50 mL容量瓶中,参加“1.4”节中所配溶液1.0 mL,将其混匀后按“1.5”节所述处理办法进行提取。进样测定Rg1,Re和Rb1,回收率别离为100.1%,98.3%,96.5%;RSD别离为1.32%,0.95%,1.26%,标明该办法回收率杰出,办法可行。
3 样品含测
按供试品溶液制备办法操作,对人参粗粉(过40目筛),超微破坏粒径别离为76.006~86.348 μm、29.963~30.025 μm、25.088~25.488 μm、22.163 μm的微粉进行人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1含量进行测定。成果如下。
3 小 结
超微破坏在中药领域的使用开始现已具有规划,在单味药生产中现已使用非常广泛。因而超微技能在人参中的使用会越来越多,经实验证明不同粒径的人参微粉中,跟着粉体的粒径越小,人参中皂苷的测定量显着增大,本文中超微破坏粒径为22.163 μm的微粉中人参皂苷总含量为最高,比粗粉中皂苷测定量高出55%。超微破坏粒径为22.163 μm时,皂苷的测定量与粗粉附近,持续减小粒径,皂苷的溶出率又添加。超微破坏粒径为25.088~25.488 μm与超微破坏粒径为22.163 μm的微粉中皂苷的测定量增加不大,因而,出于节约时刻节约物料考虑,超微破坏粒径为25.088~25.488μm的微粉是最佳。
参考文献
[1] 中华人民共和国药典委员会. 中华人民共和国药典(一部)[M].北京:我国医药科技出版社,2015:8-9.
[2] 张 晶.超微破坏对人参中皂苷测定量的影响[J].食品科学. 2009,30(18): 96-97.
[3] 何 翌,郭 琪,杜晓敏.中药细胞级微破坏对体内吸收的影响[J].中成药,1999,21(11):601-602.
本文修改:李 豆